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Dernière mise à jour : Mai 2018

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Genetique Animale et Biologie Integrative

Unité Mixte de Recherche INRA AgroParisTech GABI Génétique Animale et Biologie Intégrative

La microdissection laser permet une analyse fine in situ de l’interaction entre des bactéries extracellulaires et l’hôte

Light microscope observation of G. mellonella larvae infected with B. cereus associated with Cry1C toxin 16 hours after force-feeding. Cross–sections (16 µm) (cresyl violet staining and ethanol and xylene dehydration) with focus on the intestine (midgut). The bacteria appear colored as dark or brighter violet. Different magnifications are shown: (a) 4×; (b)10×; (c) 20×, and (d) 40×. (lum: intestinal lumen; bac: bacteria; gEpi: Gut Epithelium; pm: Peritrophic matrix
La microdissection laser : un outil pour analyser l’expression in situ des gènes de l'entérobactérie Bacillus cereus lors de la colonisation intestinale de l’hôte Galleria mellonella.

Pour permettre une compréhension plus fine des facteurs impliqués dans la pathogenèse, l’analyse des gènes exprimés ou réprimés par un pathogène permettant son développement chez l’hôte nécessite d’être la plus précise possible. Par conséquent, étudier le profil d’expression des gènes lorsque le pathogène est en contact direct avec des cellules de l’hôte lors de l’infection représente un grand intérêt. Cependant, le suivi d’expression génique des pathogènes et de l’hôte est généralement fait sur des homogénats de tissus infectés, et la notion spatio-temporelle est ainsi perdue.

Pour pallier à cela, deux équipes de l’INRAE de Jouy-en-Josas, l’unité MICALIS et la plateforme @BRIDGe de l’unité GABI, ont évalué l’utilisation de la capture par microdissection laser (LCM) dans le but de collecter des bactéries in situ directement au contact du tissu intestinal de l’hôte, et dans une zone définie. L’approche expérimentale utilise comme modèle d’infection une lignée de chenilles Gallleria mellonella axéniques et le pathogène opportuniste Bacillus cereus. Les chenilles sont infectées par gavage et la collecte des bactéries par LCM est faite sur des cryo-coupes de chenilles congelées. L’extraction de l’ARN est effectuée à deux temps : les bactéries étaient soit dans la lumière de l’intestin soit en contact avec les cellules de l’épithélium. L’analyse par qPCR a ciblé en particulier le suivi de l’expression des gènes en relation avec l’homéostasie du fer chez B. cereus.

L’étude, publié dans Virulence, montre pour la première fois que la LCM permet une analyse fine in situ de l’interaction entre des bactéries extracellulaires et l’hôte, validant également l’intérêt du modèle insecte G. mellonella, qui est un hôte alternatif, de plus en plus utilisé, pour des études d’interaction hôte -pathogènes.

Contacts: 

  • Claudia Bevilacqua 
  • Christina Nielsen-leroux

Voir aussi

Référence

Laurent Consentino, Agnès Rejasse, Nicolas Crapart, Claudia Bevilacqua & Christina Nielsen-LeRoux (2021) Laser capture microdissection to study Bacillus cereus iron homeostasis gene expression during Galleria mellonella in vivo gut colonization, Virulence, 12:1, 2104-2121, DOI: 10.1080/21505594.2021.1959790