Microscope inversé LEICA SP8

contact : Vlad Costache et Julien Deschamps, UMR 1319 INRA MICALIS

Microscope inversé ZEISS LSM 700

contact : Pierre Adenot, UMR 1198 INRAE BREED

Brève description technique

Le microscope confocal à balayage laser est un microscope optique. Il  diffère du microscope conventionnel de fluorescence de la façon suivante : la lampe servant à exciter les sondes fluorescentes est remplacée par un laser, et la lumière de fluorescence émise par les sondes est filtrée par un diaphragme de détection. Du fait de sa nature cohérente, la lumière émise par le laser est une source d'excitation ponctuelle. Cette propriété permet d'exciter point par point l'échantillon à visualiser, alors qu'une lampe d'excitation en microscopie conventionnelle éclaire en même temps tout l'échantillon. Des miroirs déflectant le faisceau laser dans le plan (scanner X,Y) permettent de réaliser cette excitation point par point de l'échantillon. Lors du passage du faisceau laser en un point (x,y), seules les sondes fluorescentes présentes à cette position dans toute l'épaisseur Z de l'échantillon sont excitées. La lumière de fluorescence émise par ces sondes lors de leur désexcitation traverse le diaphragme de détection situé au point de focalisation en amont d'un photomultiplicateur. Ainsi, seule la lumière de fluorescence émise par les sondes localisées dans le plan focal traverse ce diaphragme, alors que la lumière émise par les sondes localisées hors du plan focal est stoppée. Le signal lumineux détecté par le photomultiplicateur est numérisé, et les informations lumineuses de chaque position (x,y) servent à reconstituer l'image correspondant au plan (X,Y) scanné. Les déplacements dans l'épaisseur de l'échantillon sont effectués à l'aide d'une platine motorisée. Ceci permet d'avoir des déplacements reproductibles, et par conséquent de faire des coupes optiques adjacentes. Les images faites en microscopie confocale étant numérisées, le traitement des coupes optiques adjacentes permet de visualiser et d'extraire des informations 2D et 3D