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Dernière mise à jour : Mai 2018

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Virologie et Immunologie Moléculaires

Unité de Virologie et Immunologie Moléculaires

Influenza A/WSN/1933 (H1N1) ΔPB1-F2

Stratégie d'invalidation de PB1-F2 chez le virus Influenza A/WSN/1933 (H1N1)

Influenza A/WSN/1933 (H1N1) ΔPB1-F2

Le segment n°2 des virus Influenza A code deux protéines issues de deux cadres de lectures différents. Le premier cadre code PB1, une sous-unité du complexe polymérase du virus. Situé en +1 par rapport à PB1, se trouve le cadre de lecture de PB1-F2 (pour PB1 Frame 2). Il code une petite protéine d'environ 90 acides aminés, la taille de PB1-F2 varie en fonction des souches considérées.

ORF Segment#2

Afin d'invalider l'expression de PB1-F2 du virus WSN, nous avons utilisé l'outil de génétique inverse. Le segment #2 à été cloné, puis a été l'objet d'une quadruple mutagénèse. Cette mutagénèse dirigée a visé les 4 codons d'initiation de la traduction du cadre de lecture 2 codant PB1-F2. Les 4 ATG ont été convertis en ACG, invalidant l'initiation de PB1-F2 tout en restant silencieux dans le cadre de lecture de PB1.

Les effets de ces mutations ont été testés. Nous avons dans un premier temps validé l'incapacité du virus mutant à exprimer PB1-F2. Ceci a été vérifié en infectant des cellules A549 par les virus sauvage et mutant et en recherchant l'expression de PB1-F2 au sein de ces cellules par Western blot. Nous avons également étudié la cinétique de réplication de ces deux virus sur cellules A549 infectées à faible MOI. Ces cinétiques ont révélé une croissance identique des deux virus, indiquant que PB1-F2 n'est pas nécessaire à la réplication virale.

Western blot anti-PB1-F2

Cinétique de réplication des virus sauvage et mutant

La génétique inverse couplée à la mutagénèse dirigée nous a permis de produire deux virus qui diffèrent uniquement par leur capacité à exprimer PB1-F2 au cours de l'infection. Leurs cinétiques de réplication identiques nous ont permis de comparer leurs effets sur la réponse de l'hôte.