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Soutenance de thèse d'Angella Nzonza intitulée :
 
"Utilisation d'un rhabdovirus de poisson pour la mise en place d'une nouvelle plateforme vaccinale : exemple du virus West Nile"
 
 
La soutenance se déroulera le vendredi 20 décembre à 14h00 dans l’amphithéâtre du bâtiment 440.

Ce travail a été réalisé sous la direction du Dr Michel Brémont, dans l'équipe Virologie Moléculaire des Poissons au sein de l'unité Virologie et Immunologie Moléculaires, et a été co-encadré par Dr Sylvie Lecollinet, unité Virologie Maisons-Alfort.
 
La thèse sera soutenue devant le jury composé de :

Résumé
 
Le virus West Nile (VWN) est un flavivirus zoonotique transmis par les moustiques et pouvant infecter et causer la maladie chez les mammifères dont l’homme et le cheval. Il n’existe à l’heure actuelle aucun traitement ni de vaccin humains.
 
Notre projet a pour but de développer un vaccin vectorisé contre le VWN basé sur une nouvelle approche qui consiste à utiliser un rhabdovirus de poisson : le virus de la Septicémie Hémorragique Virale (VSHV). Le VSHV se réplique à des températures inférieures à 20°C et est donc naturellement inactivé à des températures au-delà. Son génome est constitué d'une molécule d’ARN simple brin de polarité négative d'environ 12 kb codant pour cinq protéines structurales, N, P, M, G et L et, contrairement aux autres rhabdovirus, une protéine additionnelle non structurale NV. Un système de génétique inverse offrant la possibilité d’ajouter des gènes dans le génome viral (entre les gènes N et P) et de générer des virus recombinants rVSHV a été récemment développé pour ce virus.
 
Nous avons utilisé cette stratégie pour générer un virus recombinant exprimant à sa surface l’antigène majeur du VWN : la glycoprotéine d’enveloppe (E_VWN). Elle est constituée de 3 domaines nommés I, II, et III et son domaine III (DIII_VWN) semble suffisant pour induire une protection contre le VWN. Le peptide signal d’adressage à la membrane et la région transmembranaire de la glycoprotéine G_VSHV (PS_G et TM_G) ont été ajoutés dans certains cas afin d’optimiser l’incorporation à la surface virale de cet antigène. Ainsi, nous avons d’une part généré, 4 virus recombinants exprimant le gène entier de la protéine E (E_VWN) ou délété d’une partie de sa région transmembranaire (E_VWNΔTM) (rVSHV-E_VWN ; rVSHV-PS_GE_VWN, rVSHV-PS_GE_VWNTM_G, et rVSHV-PS_GE_VWNΔTMTM_G)  et d’autre part 2 virus recombinants exprimant le DIII_VWN seul ou fusionné à une partie du domaine II (DIIDIII_VWN) de la glycoprotéine E_VWN (rVSHV-SP_G-DIII_VWN-TM_G, rVSHV-SP_G-DIIDIII_VWN-TM_G). Nous avons démontré que ces différentes protéines étaient incorporées dans les virus recombinants purifiés, à l’exception du virus rVSHV-E_VWN. L’immunisation des souris Balb/c avec les virus rVSHV-PS_GE_VWN, rVSHV-PS_GE_VWNTM_G, et rVSHV-PS_GE_VWNΔTMTM_G induit une production d’anticorps neutralisants qui est corrélée à la protection clinique et virologique des souris ayant reçu une dose létale du virus West Nile (souche IS-98-ST1), contrairement aux virus rVSHV-SP_G-DIII_VWN-TM_G et rVSHV-SP_G-DIIDIII_VWN-TM_G.
 
Cette nouvelle approche vaccinale est prometteuse mais nécessite d’être encore optimisée. Ce nouveau type de vaccin présente l’avantage d’être totalement sûr, puisqu’il est naturellement inactivé chez des vertébrés supérieurs, et qu’il peut être produit rapidement et en très grande quantité à un très faible coût. Ce travail a permis de plus de montrer que l’on pouvait faire exprimer à la surface de ces virus recombinants des fragments protéiques de longueur variable, glycosylés (E_VWN) ou non (DIII_VWN).